základní technika pro detekci RFLPs zahrnuje štěpení vzorku DNA s aplikací omezení, enzymu, který může selektivně štěpit molekuly DNA všude tam, kde krátké specifické sekvence je uznáván v procesu známém jako omezení stravitelné. Fragmenty DNA produkované digestem jsou pak odděleny délkou procesem známým jako elektroforéza agarózového gelu a přeneseny na membránu pomocí postupu Southern blot., Hybridizace membrány na značenou DNA sondu pak určuje délku fragmentů, které jsou komplementární k sondě. Omezení délky restrikčních fragment je řekl, aby nastat, když délka detekován fragment se liší mezi jednotlivci, což naznačuje non-identické sekvence homologies. Každá délka fragmentu je považována za alelu, ať už skutečně obsahuje kódovací oblast nebo ne, a může být použita v následné genetické analýze.,
Schéma RFLP o restrikčním místě ztráty
Analýza a dědictví allelickou fragmentů RFLP (NIH)
Schéma RFLP u VNTR délka variace
ExamplesEdit
k Dispozici jsou dvě společné mechanismy, které na velikosti konkrétní omezení fragment se může lišit. V prvním schématu je malý segment genomu detekován DNA sondou (silnější čára)., V alela, genom je štěpen restrikční enzymové na tři okolních lokalit (trojúhelníky), ale pouze zcela vpravo fragment bude detekována pomocí sondy. V alele a bylo místo omezení 2 ztraceno mutací, takže sonda nyní detekuje větší fúzovaný fragment běžící z míst 1 až 3. Druhý diagram ukazuje, jak by tato variace velikosti fragmentu vypadala na Jižní blot a jak by každá alela (dvě na jednotlivce) mohla být zděděna u členů rodiny.,
ve třetím schématu se volí sonda a restrikční enzym pro detekci oblasti genomu, která zahrnuje segment tandemového opakování s proměnným číslem (VNTR) (krabice ve schematickém diagramu). V alela c, existuje pět opakuje v VNTR, a sonda detekuje delší fragment mezi dvě restrikční místa. V alela d, tam jsou jen dvě opakuje v VNTR, takže sonda detekuje kratší fragment mezi dva stejné restrikční místa. Jiné genetické procesy, jako jsou inzerce, delece, translokace a inverze, mohou také vést k polymorfismům., Testy RFLP vyžadují mnohem větší vzorky DNA než testy krátkého tandemového opakování (STR).