perus tekniikka havaitsemiseksi RFLPs liittyy hienontamalla näyte DNA: n soveltaminen restriction entsyymi, joka voi valikoivasti katkaisevat DNA-molekyylin missä lyhyt, tietyssä järjestyksessä on tunnustettu prosessi tunnetaan rajoitus sulattaa. DNA-fragmenttien tuottaman sulattaa ovat sitten erotettu pituus kautta prosessi tunnetaan agaroosia geelielektroforeesilla ja siirretään kalvon kautta Southern blot-menettelyä., Kalvon hybridisoituminen merkittyyn DNA-luotaimeen määrittää sitten luotainta täydentävien fragmenttien pituuden. Rajoituskappaleen pituuden polymorfismin sanotaan tapahtuvan, kun havaitun fragmentin pituus vaihtelee yksilöiden välillä, mikä viittaa epäyhtenäiseen sekvenssihomologiaan. Kunkin fragmentti pituus pidetään alleeli, onko se todella sisältää koodaus-alueella vai ei, ja voidaan käyttää myöhemmissä geneettinen analyysi.,
Kaavamaisen RFLP by pilkkominen sivuston tappio
Analyysi ja perintö alleeliset RFLP fragmentteja (NIH)
Kaavamaisen RFLP, jonka VNTR pituus vaihtelu
ExamplesEdit
On olemassa kaksi yhteistä mekanismeja, joiden koko tietyn rajoitus fragmentti voi vaihdella. Ensimmäisessä kaaviossa pieni osa perimästä havaitaan DNA-luotaimella (paksumpi viiva)., Alleeli A: ssa perimää halkoo rajoitusentsyymi kolmessa läheisessä kohteessa (kolmiot), mutta luotain havaitsee vain oikeanpuoleisimman fragmentin. Vuonna alleeli, a -, rajoitus-sivusto 2 on kadonnut mutaatio, joten koetin tunnistaa nyt suurempi sulatettu fragmentti käynnissä sivustoja, 1 3. Toinen kaavio osoittaa, miten tämä fragmentti koon vaihtelu näyttäisi Southern blot, ja miten kukin alleeli (kaksi per yksilö) voi olla periytyy perheen jäsenet.,
kolmannella kaavamainen, koetin ja restriction entsyymi ovat päättäneet havaita alueen genomin, joka sisältää muuttujan numero tandem repeat (VNTR) segmentti (laatikot kaaviokuva). Vuonna alleeli c, on olemassa viisi toistaa, että VNTR, ja anturi havaitsee enää fragmentti välillä kaksi rajoitus sivustoja. Vuonna alleeli, d, on olemassa vain kaksi toistaa, että VNTR, jotta anturi havaitsee lyhyempi fragmentti kahden saman rajoitus sivustoja. Muut geneettiset prosessit, kuten lisäykset, poistot, translokaatiot ja inversiot, voi myös johtaa polymorfismeja., RFLP-testit vaativat paljon suurempia DNA-näytteitä kuin lyhyet tandem-toistotestit (STR).