Den grunnleggende teknikk for påvisning av RFLPs innebærer fragmentert et utvalg av DNA med anvendelse av en restriction enzym, som kan velge å holde fast ved en DNA-molekylet der en kort, bestemt sekvens er anerkjent i en prosess som er kjent som en begrensning fordøye. DNA-fragmenter som er produsert av sammendraget er så atskilt med lengde gjennom en prosess kjent som agarose gel elektroforese og overføres til en membran via Southern blot prosedyre., Hybridisering av membranen til et merkede DNA-proben deretter avgjør lengden av fragmenter som er komplementære til sonden. En restriction fragment length polymorphism sies å oppstå når lengden av en registrert fragment varierer mellom individer, som indikerer ikke-identisk rekkefølge homologies. Hvert fragment lengde regnes som et allel, om det faktisk inneholder en kodende region eller ikke, og kan brukes i påfølgende genetisk analyse.,
Skjematisk for RFLP ved spalting nettstedet tap
Analyse og arv av allel-RFLP fragmenter (NIH)
Skjematisk for RFLP av VNTR lengde variasjon
ExamplesEdit
Det er to vanlige mekanismer som er på størrelse med en bestemt begrensning fragment kan variere. I den første skjematisk, en liten del av genom er å bli oppdaget av en DNA-probe (tykkere linje)., I allel A, genom er spaltet av en restriction enzym på tre nærliggende områder (trekanter), men bare lengst fragment vil bli oppdaget ved sonden. I allel a, restriksjon område 2 har blitt tapt ved en mutasjon, slik at sonden nå oppdager de større smeltet fragment kjører fra områder som er 1 til 3. Det andre diagrammet viser hvordan dette utdraget størrelse variasjon ville se på en Southern blot, og hvordan hvert allel (to per person) kan være arvelig i medlemmer av en familie.,
I den tredje skjematisk, sonde og restriction enzym er valgt for å oppdage et område av genomet som inneholder en variable number tandem repeat (VNTR) segment (bokser i skjematisk diagram). I allelet c, det er fem gjentar i VNTR, og sonden oppdaget en lengre fragment mellom de to begrensning nettsteder. I allelet d, det er bare to gjentar i VNTR, så sonden oppdaget en kortere fragment mellom de samme to begrensning nettsteder. Andre genetiske prosesser, slik som innsettinger, slettinger, translocations, og inversjoner, kan også føre til polymorfismer., RFLP tester krever mye større utvalg av DNA enn short tandem repeat (STR) tester.