de basistechniek voor de detectie van RFLP ‘ s bestaat uit het fragmenteren van een DNA-monster met de toepassing van een restrictie-enzym, dat een DNA-molecuul selectief kan splitsen wanneer een korte, specifieke sequentie wordt herkend in een proces dat bekend staat als een restrictiesamenvatting. De fragmenten van DNA die door de digest worden geproduceerd worden dan gescheiden door lengte door een proces dat als agarose-gelelektroforese wordt bekend en aan een membraan via de Zuidelijke vlekprocedure wordt overgebracht., De kruising van het membraan aan een geëtiketteerde sonde van DNA bepaalt dan de lengte van de fragmenten die aan de sonde complementair zijn. Er wordt gezegd dat de lengte van een beperkingsfragment polymorfisme optreedt wanneer de lengte van een gedetecteerd fragment tussen individuen varieert, wat wijst op niet-identieke sequentiehomologieën. Elke fragmentlengte wordt beschouwd als een allel, of het eigenlijk een codeergebied bevat of niet, en kan in latere genetische analyse worden gebruikt.,
Schema voor RFLP door splijting site verlies
Analyse en de erfenis van allelen RFLP fragmenten (NIH)
Schema voor RFLP door VNTR lengte variatie
ExamplesEdit
Er zijn twee gemeenschappelijke mechanismen waarmee de omvang van een bepaalde beperking fragment kan variëren. In het eerste schema, wordt een klein segment van het genoom ontdekt door een sonde van DNA (dikkere lijn)., In allel A, wordt het genoom gespleten door een beperkingsenzym op drie nabijgelegen plaatsen (driehoeken), maar slechts het meest rechtse fragment zal door de sonde worden ontdekt. In allel a is beperkingsplaats 2 verloren gegaan door een mutatie, zodat ontdekt de sonde nu het grotere gesmolten fragment dat van plaatsen 1 tot 3 loopt. Het tweede diagram laat zien hoe deze fragmentgrootte variatie eruit zou zien op een zuidelijke vlek, en hoe elk allel (twee per individu) zou kunnen worden geërfd in leden van een familie.,
in het derde schema worden de probe en het restrictie-enzym gekozen om een gebied van het genoom te detecteren dat een variable number tandem repeat (VNTR) segment bevat (dozen in schematisch diagram). In allel c, zijn er vijf herhalingen in VNTR, en de sonde ontdekt een langer fragment tussen de twee beperkingsplaatsen. In allel d, zijn er slechts twee herhalingen in VNTR, zodat ontdekt de sonde een korter fragment tussen dezelfde twee beperkingsplaatsen. Andere genetische processen, zoals inserties, schrappingen, translocaties en inversies, kunnen ook tot polymorfismen leiden., RFLP tests vereisen veel grotere monsters van DNA dan korte tandem herhalen (STR) tests.