soro Fetal bovino (FBS) é a fracção líquida de sangue coagulado dos vitelos fetais, depleção de células, fibrina e factores de coagulação, mas contendo um grande número de factores nutricionais e macromoleculares essenciais para o crescimento celular. A albumina sérica bovina é o principal componente da FBS. Os factores de crescimento do FBS são essenciais para a manutenção e o crescimento das células cultivadas . FBS também contém uma variedade de pequenas moléculas como aminoácidos, açúcares, lípidos e hormônios.
FBS é usado em uma ampla gama de aplicações., Um dos principais usos do FBS é na cultura de células eucarióticas, com concentrações até 20% ou mais, onde fornece muitos nutrientes essenciais e fatores de crescimento que facilitam a sobrevivência e proliferação celular. No entanto, é importante notar que o FBS em culturas de células humanas pode introduzir artefatos de pesquisa; células humanas cultivadas com soros humanos se comportam de forma diferente daqueles cultivados com FBS ., O FBS também é usado na pesquisa, fabricação e controle de vacinas humanas e Veterinárias e de Medicamentos biotecnológicos, e usado para parar a digestão de tripsin ou para servir como um protetor na criopreservação . Os meios de cultura celular sem soro estão em uso há muitos anos. O soro Fetal bovino pode não ser o melhor suplemento para a cultura celular. Por exemplo, a albumina sérica bovina com Selenito de insulina-transferrina-sódio e/ou fator de crescimento epidérmico no meio de cultura melhora a qualidade do embrião bovino e a invasão tropoblasto em comparação com o soro fetal bovino .
o soro Fetal contém mais factores de crescimento e tem menor teor de gama-globulina (isto é, anticorpos) e soro não-fetal. Estes são importantes porque os factores de crescimento facilitam a sobrevivência celular e a proliferação, enquanto que os anticorpos podem ligar-se às células em cultura. Além disso, o soro fetal contém níveis mais baixos de proteínas do complemento (complementos) do que os de adultos ou recém-nascidos. Estes complementos têm os efeitos indesejáveis das células lising na cultura e interferindo com os imunoensaios.qual é a diferença entre o soro e o plasma?,o soro e o plasma derivam ambos do sangue total utilizando centrifugação para remover componentes, incluindo glóbulos vermelhos. A diferença entre o plasma e o soro é que as proteínas de coagulação estão presentes no plasma mas foram removidas do soro. O Plasma é geralmente preparado pela adição de anticoagulantes ao sangue antes da centrifugação, mas as proteínas de coagulação não são removidas. O soro é preparado permitindo que o sangue coagule antes da centrifugação ou por uma centrifugação extensa/progressiva. Assim, o fibrinogénio e as proteínas associadas à coagulação não estão presentes no soro.,
Em seres humanos, as seguintes 22 de proteínas constituem 99% do total de conteúdo de proteína de soro e plasma: albumina, IgG total, transferrina, fibrinogênio, o total de IgA, alfa-2-macroglobulin, o total de IgM, alfa-1-antitripsina, C3 do complemento, haptoglobulin, alfa-1-glicoproteína ácida, apolipoproteína-B, apolipoproteína A1, lipoproteína (a), fator H, ceruloplasmina, C4 complemento, o complemento do fator B, pré-albumina, C9 do complemento, C1q do complemento, e C8 complementar . O 1% restante inclui centenas de proteínas., A proteína sérica mais abundante, albumina, a 50 mg/ml, compreende cerca de metade da massa proteica total .como é testado o soro fetal de bovino antes de ser embalado e vendido?Associação Internacional da indústria sérica (ISIA) www.serumindustry.org), uma organização comercial de fornecedores de soro, estabeleceu orientações para a normalização do controlo de qualidade. Estas orientações exigem que os seguintes testes sejam realizados utilizando metodologias específicas e que os resultados dos testes estejam disponíveis como Certificado de análise (Quadro 1).,h>Teste
bactérias e fungos – esterilidade teste
mycoplasma
cytopathic agentes virais de teste
hemadsorbing agentes virais de teste
bovina vírus da diarréia viral teste
medição de pH
osmolaridade
de proteína total, determinado pelo Biuret método
de endotoxinas
a hemoglobina
eletroforética padrão
teste de desempenho, como a célula-tronco cultura
imunodifusão radial
imunoglobulina
gama-glutamil transferase (GGT)
Tabela 1., Requisitos mínimos para os testes de soro.endotoxinas, também denominadas Lipopolissacáridos (LPS) ou lipooligosacáridos (LOS), provêm das membranas exteriores de bactérias Gram-negativas e contribuem para as manifestações clínicas de uma variedade de bactérias gram-negativas patogénicas. In vivo, as endotoxinas induzem febre e a resposta inflamatória enquanto na cultura celular introduzem variação nas respostas celulares.os níveis de endotoxina são medidos pelo ensaio de lisato de Lal de Lal de limulus amebocyte., Os amebócitos são análogos aos glóbulos brancos em vertebrados e LAL é preparado a partir do sangue de Limulus polyphemus (caranguejo ferradura Americano; Figura 1). O LAL é muito sensível às endotoxinas e coagula na presença de uma quantidade mínima de endotoxina. O estado de conservação do caranguejo-ferradura americano foi avaliado e discutido na cultura popular . Muitas das populações de caranguejos ferraduras estão em risco e, portanto, cuidado deve ser tomado para protegê-los da perda.
discutimos alguns dos soros de especialidade comumente usados abaixo. As preparações séricas dedicadas a tópicos específicos de investigação, tais como soro com deficiência de lipoproteína proveniente de Kalen Biomédica para pesquisa de colesterol , ou para sistemas de expressão genética especializados, tais como soro fetal bovino com rastreio de tetraciclina , não são discutidas. a FBS Regular contém um grande número de vesículas extracelulares, algumas das quais são exossomas ., Ao realizar pesquisas exossomas com células cultivadas, é fundamental usar FBS sem exossomas. No entanto, é importante estar ciente de que os FBS com exossoma depauperados podem afectar e suportar o crescimento das células de forma diferente dos FBS regulares . Exosome-esgotada a FBS pode ser comprado diretamente de vários fornecedores comerciais ou preparados através de ultracentrifugation ou ultrafiltração, embora os efeitos da depleção de processos e/ou a suas fontes comerciais podem não ser consistentes em termos de crescimento celular e fisiologia .,outros componentes da FBS podem ser esgotados, dependendo dos Requisitos experimentais. Por exemplo, Galmozzi A et al esgotou heme de FBS com ácido ascórbico . um tratamento comum da FBS é a inactivação pelo calor, em que a FBS é aquecida a 56°C durante 30 minutos num banho de água com agitação ocasional. O objetivo é inativar quaisquer componentes do sistema de complemento estão presentes na FBS , e outros potenciais inibidores desconhecidos do crescimento celular., Anteriormente, a inactivação pelo calor destinava-se também a remover a contaminação por micoplasma, o que já não é um problema, uma vez que todos os produtos séricos são agora filtrados através de poros de tamanho suficientemente pequeno para remover o micoplasma. Note-se que a inactivação pelo calor também pode ter efeitos indesejáveis, tais como a redução da capacidade das células cultivadas de se ligarem às superfícies . vários fornecedores têm instado os utilizadores a não inactivarem o calor do FBS para a maioria das necessidades de cultura celular., Em cada caso, é aconselhável avaliar a necessidade de inactivação do calor numa determinada aplicação, uma vez que as diferentes células têm diferentes respostas para a inactivação do calor do FBS .
além disso, tal como todos os outros protocolos relativos à FBS, o processo de inactivação do calor deve ser feito com cuidado, uma vez que uma temperatura demasiado elevada ou um aquecimento prolongado irá inactivar os factores de crescimento e gerar precipitados.HY Chew et al manteve A431, HCC1569, MCF7, MDA-MB-231, MDA-MB-468, SCC25, SKBR3, T47D, RENCA e CT26.Linhas celulares WT em meio com FBS inactivados a 10% (v/v) pelo calor ., Freeman SA et al usaram FBS inativados pelo calor em todo seu estudo sobre macrófagos . Células primárias de glial do rato Aikawa T e al cultivadas em frascos revestidos de poli-d-lisina em DMEM contendo 10% de FBS inactivados pelo calor de MilliporeSigma (F2442) . Feldman D et al culta HEK293FT células em meio DMEM suplementado com inactivadas pelo calor de soro bovino fetal a partir de Seradigm (97068-085), e A549, HCT116, HT1080, A375 células com inactivadas pelo calor de soro bovino fetal a partir da Sigma (F4135) para avaliar óptico pool telas ., Kulkarni S et al manteve Hut-78 células com soro fetal bovino inactivado pelo calor de Atlanta Biologicals .
o carvão activado pode ligar-se a moléculas lipofílicas, pelo que tem sido utilizado para remover hormonas tais como androgénio, estradiol, progesterona, cortisol, testosterona, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) da FBS. Estas hormonas lipídicas séricas tendem a interferir com os sistemas de imunoensaio e os métodos de doseamento da insulina. O L Zhao et al mediu o crescimento de células tumorais em meios de cultura, complementado com 10% de soro sem carvão vegetal ., a diálise pode remover todas as moléculas com peso molecular inferior a 10.000 MW da FBS. Isto inclui moléculas polares e não polares. Hormônios, citocinas, glicose, aminoácidos, e muitos outros são removidos. A diálise também remove antibióticos e outras moléculas exógenas na FBS.
FBS dialisados da Thermo Fisher Scientific foi usado na cultura de adenocarcinoma ductal pancreático para o estudo SILAC mass spec e outros estudos SILAC, e na cultura de células HeLa com Met analogue l-AHA pulse-chase para a detecção por click-chemistry de proteínas de longa vida ., a irradiação gama pode fazer parte do processo de esterilização da borracha termoplástica de estireno-butadieno-estireno. FBS é normalmente filtrado através de filtros de 0,1 um múltiplas vezes para eliminar microorganismos. A irradiação gama pode inactivar os vírus habitualmente presentes na espécie bovina. No entanto, algumas espécies virais, como o parvovírus, são resistentes à radiação gama.
embora a FBS tenha um conteúdo bastante baixo de IgG, mesmo este nível pode ser demasiado elevado para algumas aplicações. O nível de IgG pode ser substancialmente reduzido através da cromatografia de captura., A FBS com IgG baixa é utilizada para a produção de anticorpos, síntese de proteínas recombinantes e outras aplicações.a cultura de células estaminais a cultura de células estaminais a cultura de células estaminais a cultura de células estaminais a cultura de células estaminais tem requisitos rigorosos em termos de factores de crescimento. Alguns dos factores de crescimento presentes na FBS promovem a diferenciação das células estaminais. Várias empresas oferecem borracha termoplástica de estireno-butadieno-estireno qualificada com células estaminais embrionárias, destinada a manter células estaminais indiferenciadas. No entanto, é importante testar lotes específicos de FBS para a sua aplicabilidade na manutenção da pluripotência/totipotência de diferentes tipos de células estaminais., Thermo Fisher fornece FBS qualificados para células estaminais embrionárias, como, por exemplo, usado na cultura de células ES do rato E14TG2a por Yasuda s et al .os principais fornecedores de FBS são os países de origem. Os países incluem os EUA, Austrália, Nova Zelândia, Canadá, várias nas Américas do Sul e Central.a produção e a recolha de produtos séricos são reguladas por agências governamentais. FBS é rotulado como USDA-Grade ou Europeu-Grade., Os BF de grau USDA podem ser importados para qualquer país livre de encefalopatia espongiforme bovina e de febre aftosa, enquanto os BF de grau Europeu podem ser vendidos na maioria dos países europeus e asiáticos.como cuidar / armazenar soro fetal bovino?
a FBS é melhor congeladas, entre -5 a -20°C, e pode ser descongelado em temperatura entre 2 a 8°C. é muitas vezes útil para a alíquota e congelar o soro em partes mais pequenas, muitas vezes com 50 ml de tubos, para evitar muitos de congelamento e descongelamento ciclos. Ocasionalmente, algumas alíquotas de FBS permanecem em um líquido a temperaturas geladas., Isto é devido à falta de um centro de nucleação (matéria particulada) para a cristalização (congelamento) para começar. Se simplesmente agitares os tubos com o dedo, eles solidificam-se quase instantaneamente.
é comum ter algum precipitado após descongelamento. Os precipitados, provavelmente devido à desnaturação de algumas das proteínas séricas, podem ser eliminados por uma breve centrifugação, o que geralmente não afeta a qualidade do soro.muitos fornecedores fornecem borracha termoplástica de estireno-butadieno-estireno com diferentes graus, País de origem e tratamento., A borracha termoplástica de estireno-butadieno-estireno, por si só, é uma mistura complexa e é de esperar variabilidade entre diferentes graus, Fornecedores e lotes. Por conseguinte, é essencial estabelecer um processo de selecção e avaliação do FBS. É uma boa idéia examinar a literatura para determinar como uma seleção particular de FBS foi usada anteriormente em pesquisas similares, ou para a mesma cultura celular e para prestar muita atenção à potencial variação lot-to-lot na FBS. Para ajudar com isso, Labome realizou uma pesquisa sobre o uso do FBS a partir de publicações científicas, discutidas abaixo, para ajudar nossos visitantes a selecionar o FBS mais adequado.,soro Fetal bovino na literatura estudos literários sobre os materiais utilizados. Aqui estão resumidas as publicações que citaram o soro fetal bovino. As publicações são um subconjunto aleatório de mais de 10.000 publicações.
Os principais fornecedores de FBS são Tecnologias (agora parte da Thermo Fisher Scientific), Thermo Fisher Scientific Hyclone (agora parte da GE LifeScience), e MilliporeSigma (Tabela 2). Thermo Fisher Scientific / Life Technologies é uma empresa global de biotecnologia com sede em Carlsbad, Califórnia., É formada em 2008 com a fusão da Invitrogen Corporation e Applied Biosystems Inc. Muitos de seus produtos estão sob a marca Gibco. Eles fornecem produtos de cultura de células, tais como meio de cultura de células, FBS e outros reagentes relevantes. A empresa fundiu-se com a Thermo Fisher Scientific em 2014.
FBS from Life Technologies has been used to study nucleolus as a phase-separated protein quality control in HEK293T and HeLa cells ., As células Pandolfini L et al cultivaram HEK293T e A549 em DMEM complementadas com 10% de células Gibco FBS (10270-106) e Caco-2 no meio essencial mínimo da Águia, complementadas com 20% de células Gibco FBS (10270-106) . As células HEK293T são muitas vezes mantidas com 10% de soro fetal bovino do termo Fisher .
GE Healthcare HYCLONE FBS is widely used. De Cecco M et al usou-o em 15% para manter os fibroblastos senescentes LF1, IMR-90 e WI-38 nos meios F-10 do Ham ., Nicetto D et al usou Hyclone FBS (SH30071) para terminar a digestão de tripsin e manter as células embrionárias . Laflamme C et al manteve as células HEK-293 em DMEM de elevada glicose da GE Healthcare (SH30081.01) contendo 10% de soro de vitelo bovino da GE Healthcare (SH30072.03) .
Frohner IE et al mantida Neuro-2a (N2a) e Cos-7 células da American Type Culture Collection em meio DMEM contendo 10% de FBS de Bovogen, França . Células U2OS cultivadas em DMEM com elevada glucose contendo 10% de soro fetal bovino isento de tetraciclina a partir de Wisent (081150) . Dong JX et al manteve culturas hipocampais primárias em Matrigel de Corning com 5% de soro fetal bovino de Atlanta Biologicals (S11550) ., Os mioblastos murinos c2c12 cultivados com DMEM completados com 10% de soro fetal bovino de VWR (89510-186) . Zhao n et al cultivaram células U2OS de ATCC (HTB-96) em meio DMEM com 10% (v/v) de soro fetal bovino de altos biológicos . Liu X et al cultivou células murinas 4T1 em Dmemsupplementadas com 10% de soro fetal bovino de Biochrom .