Polimorfismul lungimii fragmentelor de restricție

tehnica De bază pentru detectarea RFLPs implică fragmentarea un eșantion de ADN cu enzime de restricție, care pot selectiv clivează o moleculă de ADN oriunde o scurtă secvență specifică este recunoscută într-un proces cunoscut ca o restricție de digerat. Fragmentele de ADN produse de digest sunt apoi separate prin lungime printr-un proces cunoscut sub numele de electroforeză în gel de agaroză și transferate într-o membrană prin procedura Southern blot., Hibridizarea membranei la o sondă ADN marcată determină apoi lungimea fragmentelor care sunt complementare sondei. Se spune că polimorfismul lungimii fragmentului de restricție apare atunci când lungimea unui fragment detectat variază între indivizi, indicând omologii de secvență ne-identice. Fiecare lungime a fragmentului este considerată o alelă, indiferent dacă conține sau nu o regiune de codificare și poate fi utilizată în analiza genetică ulterioară.,

ExamplesEdit

Există două mecanisme comune prin care dimensiunea de un anumit fragment de restricție poate varia. În prima schemă, un mic segment al genomului este detectat de o sondă ADN (linie mai groasă)., În alela a, genomul este scindat de o enzimă de restricție la trei locuri din apropiere (triunghiuri), dar numai fragmentul din dreapta va fi detectat de sondă. În alela a, site-ul de restricție 2 a fost pierdut de o mutație, astfel încât sonda detectează acum fragmentul fuzionat mai mare care rulează de la site-urile 1 la 3. A doua diagramă arată modul în care această variație Dimensiune fragment ar arata pe o pată de Sud, și modul în care fiecare alelă (două pe individ) ar putea fi moștenită în membrii unei familii.,în a treia schemă, sonda și enzima de restricție sunt alese pentru a detecta o regiune a genomului care include un segment de repetare tandem cu număr variabil (VNTR) (cutii din diagrama schematică). În alela c, există cinci repetări în VNTR, iar sonda detectează un fragment mai lung între cele două site-uri de restricție. În alela d, există doar două repetări în VNTR, astfel încât sonda detectează un fragment mai scurt între aceleași două site-uri de restricție. Alte procese genetice, cum ar fi inserțiile, ștergerile, translocațiile și inversiunile, pot duce, de asemenea, la polimorfisme., Testele RFLP necesită probe mult mai mari de ADN decât testele scurte de repetare tandem (STR).