Den grundlæggende teknik til påvisning af RFLPs indebærer en opdeling af en prøve af DNA med anvendelsen af et restriktionsenzym, som selektivt kan kløve et DNA-molekyle, hvor en kort, bestemt sekvens er anerkendt i en proces kendt som en begrænsning fordøje. DNA-fragmenterne produceret af fordøjelsen adskilles derefter efter længde gennem en proces kendt som agarosegelelektroforese og overføres til en membran via Southern blot-proceduren., Hybridisering af membranen til en mærket DNA-sonde bestemmer derefter længden af de fragmenter, der er komplementære til sonden. En restriktionsfragmentlængdepolymorfisme siges at forekomme, når længden af et detekteret fragment varierer mellem individer, indikerer ikke-identiske sekvenshomologier. Hver fragment længde betragtes som en allel, uanset om det faktisk indeholder en kodning region eller ej, og kan anvendes i efterfølgende genetisk analyse.,
Skematisk for RFLP af hæmagglutininets kløvningssted, tab
Analyse og arv af allel-RFLP-fragmenter (NIH)
Skematisk for RFLP af VNTR længde variation
ExamplesEdit
Der er to almindelige mekanismer, som størrelsen af en særlig begrænsning fragment kan variere. I det første skematiske detekteres et lille segment af genomet af en DNA-sonde (tykkere linje)., I allel A spaltes genomet af et restriktionsen .ym på tre nærliggende steder (trekanter), men kun det yderste højre fragment detekteres af sonden. I allel a er restriktionssted 2 gået tabt ved en mutation, så sonden registrerer nu det større smeltede fragment, der løber fra steder 1 til 3. Det andet diagram viser, hvordan denne fragment størrelse variation ville se på en sydlig skamplet, og hvordan hver allel (to pr individ) kan nedarves i medlemmer af en familie.,
i det tredje skematiske vælges sonden og restriktionsen .ymet til at detektere et område af genomet, der inkluderer et variabelt tal tandem repeat (VNTR) segment (kasser i skematisk diagram). I allel c er der fem gentagelser i VNTR, og sonden registrerer et længere fragment mellem de to begrænsningssteder. I allel d er der kun to gentagelser i VNTR, så sonden registrerer et kortere fragment mellem de samme to begrænsningssteder. Andre genetiske processer, såsom indsættelser, sletninger, translokationer og inversioner, kan også føre til polymorfier., RFLP-test kræver meget større prøver af DNA end korte tandem-gentagelsesforsøg (STR).