Nematomorpha è un phylum di animali che è stato poco studiato. Nonostante la loro distribuzione mondiale, i cicli di vita dettagliati di Nematomorpha non sono stati completamente documentati . Parachordodes o vermi Gordius appartengono al phylum Nematomorpha (Gordiida, Gordioidea)., Gli adulti di Parachordodes (Chordodidae: Parachordodinae), Gordius (Gordiidae), o i generi della sottofamiglia Chordodinae (Chordodidae), anche comunemente noti come vermi dei capelli, sono abitanti d’acqua dolce a vita libera, e le loro larve sono prima a vita libera e poi infettano ospiti intermedi. Quando gli ospiti intermedi vengono mangiati dagli ospiti finali, le larve si sviluppano in giovani e crescono fino a dimensioni adulte. L’estremità caudale del maschio è biforcata o ha un solco dorsoventrale in Gordiidae e Parachordodinae, ma non in Chordodinae., Parachordodes o Gordius worms hanno stadi larvali parassitari, e gli ospiti finali includono la mantide e alcune specie carnivore o onnivore di Ortotteri (Acrididae: cavallette, Gryllidae: grilli, ecc.), e coleotteri (Carabidae: coleotteri terrestri).
I record di parassitismo umano accidentale con Parachordodes, Paragordius o Gordius sono rari in letteratura, anche se molti sono stati identificati in diverse parti del mondo da esemplari recuperati dalla bocca, dall’uretra e dall’ano . Sei casi umani di Gordius sp. sono stati segnalati in Giappone ., In questi casi, i vermi sono stati vomitati ed escreti nelle feci e dall’ano. Un caso umano di un verme Gordius trovato nel vomito e un altro caso di un verme Parachordodes trovato nel sistema urinario sono stati segnalati anche in Corea . Inoltre, almeno 13 specie di Nematomorpha d’acqua dolce sono state registrate fino ad oggi in Giappone . Inoltre, alcuni o nuovi record di Nematomorpha negli insetti sono stati recentemente segnalati dalle prefetture di Shiga, Niigata, Nara, Gifu, Kyoto e Fukuoka, in Giappone, e dati molecolari e morfologici sono stati utilizzati per analizzare la relazione sistematica di Nematomorpha ., Del genere Parachordodes sono state segnalate 2 specie in Giappone: Parachordodes okadai e P. lestici .
Il presente rapporto tratta di una specie di verme dei capelli raccolti da istituti di laboratorio a novembre e dicembre 2009, uno dei quali è stato vomitato da una donna di 80 anni e l’altro è stato raccolto dalla bocca di un bambino di 1 anno da sua madre. I soggetti vivevano nella città di Kyoto, nella prefettura di Kyoto, e nella città di Nara, nella prefettura di Nara, in Giappone. La donna ha vomitato un verme dopo aver gargarizzato con una soluzione salina mentre sentiva che qualcosa le era stato preso in gola mentre era sdraiata a letto., Il verme è stato conservato in formalina al 10% prima dell’esame. Aveva mangiato verdure raccolte da un giardino privato. L’altro verme dalla bocca di un ragazzo fu rimosso da sua madre. Entrambi i vermi sono stati esaminati ad occhio nudo e microscopicamente. Avevano le caratteristiche morfologiche tipiche dei vermi nematomorfi. Gli esemplari misuravano 13 cm e 12,5 cm di lunghezza ed entrambi avevano una larghezza uniforme di circa 0,1 cm (Fig. 1, ,2).2). I corpi di entrambi erano nero-marrone con un anello del collo (pigmentazione scura) ma senza linea ventrale né linea dorsale nella cuticola nello stato conservato (Figs. 1, ,2).,2). Il corpo era cilindrico e aveva lo stesso diametro lungo tutta la sua estensione, anche se in qualche modo si restringeva anteriormente. L’estremità anteriore era arrotondata con un’apertura della bocca. L’estremità posteriore era biforcata. I lobi della coda erano lunghi 0,1 mm e il rapporto tra la lunghezza del lobo e la larghezza era 0,5. Un’apertura cloaca è stata trovata in 1 verme maschio (Fig. 1). L “estremità posteriore dei vermi maschi era spirale arruolato e furcated in 2 lobi caudali, che erano quasi cilindrica, anche se un po” concava sulla loro superficie medio-ventrale., Non era presente una piega crescentica postcloacale (cresta cuticolare), il che significava che questi 2 esemplari umani non appartenevano al genere Gordius. Di conseguenza, la morfologia di questi vermi è stata analizzata su sezioni di tessuto al microscopio ottico (Fig. 3).
Un maschio hairworm di Parachordodes sp. vomitato da una donna di 80 anni. Corpo intero (A), parte anteriore (B) e parte posteriore (C).
Le analisi del DNA (sequenza parziale 18S rRNA) sono state condotte utilizzando il database GenBank., Per le analisi del DNA, il verme fissato con formalina al 10% è stato lavato 3 volte usando PBS, e una parte del verme è stata tagliata usando un vetro di copertura pulito e rotto usando pestelli a microtubo (Scientific Specialties Inc., Lodi, California, USA) per l’estrazione del DNA. Il DNA è stato estratto e purificato utilizzando i kit di sangue e tessuti DNeasy (Qiagen GmbH, Hilden, Germania) secondo le istruzioni del produttore. La regione nucleare del gene RNA ribosomiale 18S (18S rDNA) di entrambi i worm è stata amplificata utilizzando primer 3F e 9R riportati in precedenza ., L’amplificazione PCR è stata eseguita in un volume di 50 µl contenente 1×tampone PCR, 2 mm MgCl2, 250 µM di ciascun dNTP, 0,5 µM di ciascun primer, 1,25 unità di TaKaRa Ex Taq Versione Hot Start (TaKaRa Shuzo Co. Ltd., Otsu, Giappone), e 3 µl di campione di DNA. La reazione PCR è stata eseguita nelle seguenti condizioni: I campioni sono stati denaturati a 95℃ per 3 min; quindi sono stati sottoposti a 35 cicli di 94℃ per 30 sec, 55℃ per 30 sec e 72℃ per 1 min, con estensione finale a 72℃ per 7 min su un termociclatore (GeneAmp PCR System 9700; Applied Biosystems, Foster City, California, USA)., I prodotti PCR sono stati purificati utilizzando un kit di purificazione PCR QIAquick (Qiagen GmbH, Hilden, Germania) e sono stati sequenziati in entrambe le direzioni su un sequencer automatico (ABI 3130; Applied Biosystems, Foster City, California, USA). Sono stati ispezionati cromatogrammi di sequenza da ciascun filamento (Sequencher Versione 4.1; Gene Codes Corp., Ann Arbor, Michigan, USA). Le sequenze ottenute da entrambi i worm sono state allineate con le sequenze nucleotidiche disponibili di altre specie di nematomorpha utilizzando Clustal X 2.0 (http://www.clustal.org/) con valori iniziali di parametro fissi., Un albero è stato costruito utilizzando l’algoritmo Neighbor-Joining basato su distanze evolutive calcolate utilizzando il modello Kimura a 2 parametri con campionamento bootstrap 1,000. L’albero risultante è stato disegnato utilizzando il software Njplot (http://pbil.univ-lyon.fr/software/njplot.html).
Sezioni di tessuto hanno rivelato che la superficie corporea era ricoperta da una cuticola di 25-50 µm di spessore e rivestita con ipoderma monostrato di 5-10 µm di spessore senza cordone laterale. Lo strato muscolare era spesso 25-60 µm (Fig. 3)., Le cellule parenchimatose riempivano lo pseudocoel alla capacità vicina e un cordone nervoso ventrale, un tratto digestivo e un paio di organi genitali maschili sono stati identificati nel parenchima. Lo spessore dello strato muscolare era 30-80 µm e il cordone nervoso ventrale era 80×50 µm. La superficie cuticolare era un po ‘ ruvida e aveva areole di piccole dimensioni. Dopo la rimozione degli strati muscolari e ipodermici dei 2 vermi dall’uomo, la struttura della cuticola è risultata uguale a quella del genere Parachordodes sp. contenente 2 tipi di areole grandi e piccole morfologicamente (Fichi. 3, ,4).4)., Le piccole areole con granuli hanno le stesse caratteristiche dei Parachordodes lestici, ma diverse dalle piccole areole di P. okadai , che ha superficie liscia. Le grandi areole (megareole) erano quasi rotonde e quelle del verme nel caso 1 erano 23,9±2,5 (media±SD) µm di lunghezza e 23,5±2,7 µm di larghezza, e quelle nel caso 2 erano 23,3±1,2 µm di lunghezza e 23,1±1,0 µm di larghezza. Le megareole sono molto diverse in queste 2 specie, P. lestici e P. okadai. Sono quasi rotondi in P. lestici, ma allungati in P. okadai., Gli attuali esami morfologici dei casi umani rivelano che i vermi presenti hanno le caratteristiche di P. lestici e potrebbero essere giustificati per determinare come P. lestici. Tuttavia, le areole (2 tipi di piccole dimensioni-areole e megareole) sono apparse sulla cuticola in Fig. 4 erano molto simili con quelli di Schmidt-Rhaesa et al. . Anche le caratteristiche morfologiche e le dimensioni dei megareoli erano uguali a quelle di Schmidt-Rhaesa et al. . Pertanto, i 2 vermi nel presente studio possono essere la stessa specie di Parachordodes megareolatus che è stato derivato dal sistema urinario umano in Corea .,
Due tipi di piccole dimensioni-areole (s) e megareole (m) sulla cuticola di Parachordodes sp. hairworms da esseri umani (A: basso ingrandimento; B: alto ingrandimento).
I membri della classe Gordiacea appartengono a 2 famiglie riconosciute, Gordiidae (Gordius) e Chordodidae. Il primo ha una cuticola liscia, ma in alcune specie di Gordiidae si verificano anche areole. La cuticola nel secondo gruppo è ruvida con vere areole. Questi gruppi di sottofamiglie comprendono 18 generi (Cordodi, Paragordius, Parachordodes, Neochordodes, Pseudogordius e altri)., Ci sono anche altri generi con 2 tipi di areole, ma caratteristica per Parachordodes è che 1 tipo è molto grande e ha un poro in cima, e questo tipo è chiamato superareole . Queste caratteristiche dei megareoli suggeriscono fortemente che i vermi attuali possano essere diagnosticati come Parachordodes Camerano, 1897 . Dal Giappone, 17 specie di Nematomorpha (Gordiida) sono state descritte fino ad oggi e 4 specie di Nematomorpha sono state segnalate anche in Corea .,
È stata condotta una relazione filogenetica secondo il gene 18S rRNA (1.414 bp) e gli attuali vermi sono stati identificati come una specie geneticamente più vicina alle specie Paragordionus (GenBank no. AF421769 e AF421770) ed erano diversi dai vermi Gordius (GenBank no. AF421766, GAU88337, X87985 e X80233) in un’analisi ad albero (Fig. 5). Il sequenziamento del DNA del verme Parachordodes non appare sul database, quindi sono necessarie ulteriori informazioni su questa specie in futuro.,
Analisi filogenetiche di hairworms (classe Gordiacea) da esseri umani sulla base di 18S rRNA (1.414 bp). La storia evolutiva è stata dedotta utilizzando il metodo Neighbor-Joining (NJ). Le distanze evolutive sono state calcolate usando il metodo dei parametri Kimura-2 e sono nelle unità del numero di sostituzioni di base per sito. I valori di Bootstrap sono mostrati accanto ai rami. Un valore di bootstrap elevato 0,988 (numero di 1.000 repliche) è stato ottenuto ad una giunzione di Paragordionus spp. e gli attuali 2 vermi.,
Per quanto riguarda la rotta di invasione, i casi umani presenti possono aver accidentalmente ingerito insetti, come un grillo o un coleottero che è un ospite intermedio. Gli esemplari attuali sono il primo verme dei capelli umani registrato, Parachordodes sp. in Giappone.