pysty erottamaan bakteeri-lajeja on tärkeää monestakin syystä, diagnosointi infektio tai tarkistaa elintarvikkeiden turvallisuuden, tunnistaa mikä laji se on, että antaa juustoa se on fantastinen luonne. Bakteeri laji, ja jopa erityisiä kantoja voidaan erottaa käyttämällä useita molekyyli-tekniikoita, kuten PCR, kvantitatiivinen PCR, genomin sekvensointi ja massaspektrometria., Mutta jopa pääsemättä molekyyli nitty gritty, on olemassa fenotyyppisiä eroja ryhmien bakteerien, joita voidaan käyttää erottamaan ne. Tämä sisältää ominaisuuksia, kuten niiden muoto (basilleja vs kokkeja esimerkiksi), kasvua erityisesti ravinteita ja mieluummin korkea tai matala happi-ympäristöissä. Riippuen ominaisuus tutkitaan, bakteeri-lajit voidaan jakaa kahteen laajaan ryhmään, mutta yhdessä tämä tieto voi kaventaa mahdollisia identiteettejä suuresti., Yksi tällainen hyödyllinen luokittelu – jos bakteeri on Gram-positiivinen vai Gram-negatiivinen – perustuu rakenne bakteerien soluseinän.
Ero rakenteen perusteella Gram-positiivisia vs Gram-negatiiviset bakteerit
alla Oleva kaavio havainnollistaa eroja rakenteessa Gram-positiiviset ja Gram-negatiiviset bakteerit. Kaksi tärkeimmät ominaisuudet, jotka johtavat erilaiset visualisointi ominaisuuksia Gram-positiiviset ja Gram-negatiiviset lajit ovat paksuus peptidoglykaanin kerros-ja läsnäolo tai puuttuminen ulompi rasva-kalvo., Tämä johtuu siitä, että seinän rakenne vaikuttaa solujen kykyä säilyttää kristalli violetti tahra käytetään Gram-värjäys menettely, joka voidaan sitten visualisoida alle kevyt mikroskoopilla.
Gram-positiivisia bakteereja on paksu peptidoglykaanin kerros ja ei ulompi rasva kalvo, kun taas Gram-negatiiviset bakteerit ovat ohut peptidoglykaanin kerros ja ulompi rasva-kalvo.
Kuin Gram-positiiviset bakteerit puuttuu ulompi rasva kalvo, kun oikein viitaten niiden rakenne sen sijaan värjäystä ominaisuuksia, kutsutaan monoderms., Gramnegatiivisten bakteerien riivaama ulompi lipidikalvo tarkoittaa, että niiden fysikaaliseen rakenteeseen viitattaessa niitä kutsutaan didermeiksi.
Gram-värjäys tekniikka kehitettiin vuonna 1884 tanskan bacteriologist Hans Christian Gram1. Vaikka Gram-värjäys ei kerro tiettyjä lajeja etsit, se voi olla nopea tapa kaventaa suuresti luettelo mahdollisista ehdokkaista ja suoran seurannan testaus tarvittaessa.,
Gram Gram-positiivinen vs negatiivinen tahra
Gram-värjäys menettely – Valmistelee näyte
1. Merkitse puhdas lasimikroskooppivyöry näytteidentunnistuksella. Varmista, että käytät kynää niin monta mustetta poistetaan reagensseilla, joita käytetään värjäyksessä.
2. Jos valmistautuu teidän dian neste bakteeri-kulttuuri:
Taputtele pieni pisara kulttuurin päälle dian käyttämällä steriiliä silmukka. Varovasti preparaatti pisaran liikkein alueelle, noin 1 cm halkaisijaltaan., Erittäin tiheä kulttuureissa se voi olla tarpeen pre-laimenna oman kulttuurin varmistaa yksittäisten bakteeri-solut voidaan nähdä mikroskoopilla seuraavaa värjäystä.
Jos lähdemateriaali on peräisin bakteeri-levy:
Sekoita silmukka siirtomaa materiaali steriiliä fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) ja sitten jatka kuten neste kulttuuria.
3. Kun tahra on kuivunut, siirrä tuhrittu liuku liekin läpi kaksi tai kolme kertaa.
Tämä tappaa mikrobit kokeena ja korjauksia näyte dia, varo ylikuumenemisen näyte kuitenkin, koska tämä voi vääristää solujen morfologia.,
Gram-värjäys menettely – Gram-värjäys näytteen
1. Varovasti tulvi muste kristallivioletilla ja jätä 1 minuutiksi. Kallista liukumäkeä hieman ja huuhtele varovasti vesijohtovedellä tai tislatulla vedellä.
Crystal violet on vesiliukoinen väriaine, joka tulee peptidoglykaanin kerros bakteerien soluseinän.
2. Ruiskuta varovasti Gramin jodilla ja anna vaikuttaa 1 minuutti. Kallista liukumäkeä hieman ja huuhtele varovasti vesijohtovedellä tai tislatulla vedellä. Mustelma näyttää nyt violetilta.,
gramman jodiliuosta (jodia ja kaliumjodidia) lisätään muodostaen kompleksin kidevioletin kanssa, joka on paljon suurempi ja liukenematon veteen.
3. Dekolorize preparaatti käyttäen 95% etyylialkoholia tai asetonia. Kallista työnnä hieman ja soveltaa alkoholia tipoittain, kunnes alkoholi toimii lähes kirkasta (5-10 sekuntia). Huuhtele välittömästi vedellä liiallisen dekolorisoinnin välttämiseksi.
Dekolorizer kuivattaa peptidoglykaanikerroksen kutistaen ja kiristäen sitä., Gram positiivisia bakteereja, suuri kristalli violetti-jodi-kompleksit ovat sitten pysty tunkeutumaan ja paeta paksu peptidoglykaanin kerros, jolloin violetti värjätään solut. Kuitenkin, Gram-negatiiviset bakteerit, ulompi kalvo on hajonnut, ohut peptidoglykaanin kerros on pystynyt säilyttämään crystal violet-jodi komplekseja ja väri on hävinnyt.
4. Varovasti tulva safranin vastapaino ja jätä 45 sekuntia. Kallista liukumäkeä hieman ja huuhtele varovasti vesijohtovedellä tai tislatulla vedellä.,
Safraniini on heikosti vesiliukoinen ja värjää bakteerisolut vaalean punaiseksi, mikä mahdollistaa gramnegatiivisten solujen visualisoinnin häiritsemättä Gram-positiivisten solujen purppuran tarkkailua.
5. Pyyhi liukumäki kuivaksi suodatinpaperille ja katso sitten sivele valomikroskoopilla öljykylvyn alla.
Gram-positiivisia vs Gram-negatiiviset väri
Gram-positiivisiin bakteereihin
Gram-positiiviset bakteerit ovat erottuva violetti ulkonäkö kun havaittiin alle valo mikroskooppi seuraavia Gram-värjäys., Tämä johtuu säilyttäminen purple crystal violetti tahra paksu peptidoglykaanin kerros soluseinän. Esimerkkejä grampositiivisista bakteereista ovat kaikki stafylokokit, kaikki streptokokit ja jotkut listerialajit.
Gram-negatiiviset bakteerit
Gram-negatiiviset bakteerit näkyvät vaalean punertava väri, kun havaittu alle valo mikroskooppi seuraavia Gram-värjäys. Tämä johtuu siitä, että rakenne niiden soluseinä on pystynyt säilyttämään crystal violetti tahra niin ovat väriltään vain safranin counterstain., Esimerkkejä Gramnegatiivisista bakteereista ovat enterokokit, salmonellalajit ja pseudomonas-lajit.
Gram-värjäystä ei voida käyttää luotettavasti bakteerien fylogeneettisten suhteiden arviointiin. Grampositiivisten lajien yhden kalvon arvellaan olevan esi-isien tila. Historiallisesti oli ajateltu, että Gramnegatiivisista bakteereista löytynyt toinen kalvo kehittyi vain kerran, joten kaikki Gramnegatiiviset lajit olivat läheisempää sukua toisilleen kuin Gram-positiiviset lajit., Kuitenkin, geneettinen analyysi on sittemmin osoittanut, että tämä ei ole tapaus ja se on todennäköisesti kehittynyt useita kertoja eri suvusta – tuote, samansuuntaisesta kehityksestä.