is képes, hogy megkülönböztesse a baktérium fajok fontos, számos ok miatt, a fertőzés diagnosztizálása, illetve ellenőrzi az élelmiszer-biztonság, annak megállapítása, hogy mely faj az, hogy ad egy sajt, fantasztikus figura. Baktérium faj, sőt konkrét törzsek lehet differenciált használata számos molekuláris technikák, mint a PCR, mennyiségi PCR, genom szekvenálás, valamint tömegspektrometriás., De még anélkül, hogy bekerülne a molekuláris nitty kavicsos, vannak fenotípusos különbségek a baktériumok csoportjai között, amelyek megkülönböztethetők. Ez magában foglalja az olyan jellemzőket, mint az alakjuk (például bacillus vs cocci), különösen a tápanyagok növekedése, valamint a magas vagy alacsony oxigéntartalmú környezet előnyben részesítése. A vizsgált jellemzőtől függően a baktériumfajok széles csoportokra bonthatók, de ezek az információk együttesen jelentősen szűkíthetik a lehetséges identitásokat., Az egyik ilyen hasznos osztályozás-ha egy baktérium Gram-pozitív vagy Gram – negatív-a bakteriális sejtfalak szerkezetén alapul.
Gram-pozitív vs Gram-negatív baktériumok szerkezetének különbsége
az alábbi ábra a Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok szerkezetében mutatkozó különbségeket szemlélteti. A Gram-pozitív és Gram-negatív fajok eltérő vizualizációs tulajdonságaihoz vezető két fő jellemző a peptidoglikán réteg vastagsága és a külső lipidmembrán jelenléte vagy hiánya., Ennek oka az, hogy a falszerkezet befolyásolja a sejt azon képességét, hogy megtartsa a Gram festési eljárásban használt kristály lila foltot, amelyet ezután fénymikroszkóp alatt lehet megjeleníteni.
a Gram-pozitív baktériumok vastag peptidoglikán réteggel rendelkeznek és nincs külső lipidmembránjuk, míg a Gram-negatív baktériumok vékony peptidoglikán réteggel rendelkeznek és külső lipidmembránnal rendelkeznek.
mivel a Gram-pozitív baktériumoknak nincs külső lipidmembránja, ha helyesen utalnak a szerkezetükre, nem pedig a festési tulajdonságokra, monodermáknak nevezik., A gram-negatív baktériumok által birtokolt külső lipidmembrán azt jelenti, hogy fizikai szerkezetükre hivatkozva didermsnek nevezik őket.
a Gram festési technikát Hans Christian Gram1 Dán bakteriológus fejlesztette ki 1884-ben. Míg egy gramm folt nem fogja megmondani, hogy az adott faj, amit keres, ez lehet egy gyors módja annak, hogy szűkítse jelentősen a listát a potenciális jelöltek, valamint a közvetlen nyomon követési vizsgálat, ahol szükséges.,
Gram pozitív vs Gram negatív folt
Gram folt eljárás – minta előkészítése
1. Címkézze meg a tiszta üvegmikroszkóp csúszkát a minta azonosításával. Győződjön meg róla, hogy ceruzát használ, mivel a festési eljárás során használt reagensek eltávolítják a tintákat.
2. Ha a diát folyékony bakteriális tenyészetből készíti:
Egy kis cseppkultúrát helyezzen a csúszdára steril hurok segítségével. Óvatosan kenje meg a cseppet körkörös mozdulatokkal körülbelül 1 cm átmérőjű területre., Nagyon sűrű kultúrák esetében szükség lehet A kultúra előzetes hígítására annak biztosítása érdekében, hogy az egyes bakteriális sejtek mikroszkóp alatt láthatók legyenek a festés után.
Ha a forrásanyag egy baktériumlemezből származik:
Reszuszpendáljon egy kolónia anyag hurokját steril foszfát pufferelt sóoldatban (PBS), majd folytassa, mint egy folyékony tenyészetet.
3. Miután a kenet levegője megszáradt, két vagy három alkalommal vezesse át a maszatos csúszkát egy lángon.
ez megöli a kenetben lévő mikrobákat, és rögzíti a mintát a diához, ügyeljen arra, hogy ne melegítse túl a mintát, mivel ez torzíthatja a sejt morfológiáját.,
Gram folt eljárás-Gram festés minta
1. Finoman elárasztja a kenetet kristály ibolyával, majd hagyja 1 percig. Enyhén döntse meg a csúszkát, majd óvatosan öblítse le csapvízzel vagy desztillált vízzel.
A Kristálylila egy vízben oldódó festék, amely belép a peptidoglikán rétegbe a bakteriális sejtfalban.
2. Óvatosan öntsük a kenetet Gram jóddal, majd hagyjuk 1 percig. Enyhén döntse meg a csúszkát, majd óvatosan öblítse le csapvízzel vagy desztillált vízzel. A kenet most lila lesz.,
Gram jódoldatát (jódot és kálium-jodidot) adják hozzá, hogy komplexet képezzen a kristály ibolyával, amely sokkal nagyobb és vízben oldhatatlan.
3. A kenetet 95% etil-alkohollal vagy acetonnal színezzük. Döntse meg kissé a csúszkát, majd cseppenként alkalmazza az alkoholt, amíg az alkohol majdnem tiszta (5-10 másodperc). Azonnal öblítse le vízzel, hogy elkerülje a túlzott elszíneződést.
A színtelenítő dehidratálja a peptidoglikán réteget, zsugorítja és meghúzza., A Gram-pozitív baktériumokban a nagy kristály ibolyaszínű-jód komplexek ezután nem képesek behatolni és kiszabadulni a vastag peptidoglikán rétegből, ami Lila Foltos sejteket eredményez. Gram-negatív baktériumok esetén azonban a külső membrán lebomlik, a vékony peptidoglikán réteg nem képes megtartani a kristály lila-jód komplexeket, a szín elvész.
4. Óvatosan árassza el a safranin ellencsapást, majd hagyja 45 másodpercig. Enyhén döntse meg a csúszkát, majd óvatosan öblítse le csapvízzel vagy desztillált vízzel.,
A Szafranin gyengén vízben oldódik, és a baktériumsejteket világosvörösre festi, lehetővé téve a gram-negatív sejtek vizualizációját anélkül, hogy megzavarná a Gram-pozitív sejtek lila megfigyelését.
5. Blot a csúszda száraz szűrőpapírra, majd tekintse meg a kenet segítségével fénymikroszkóp alatt olaj-merítés.
Gram-pozitív vs Gram-negatív szín
Gram-pozitív baktériumok
Gram-pozitív baktériumok megkülönböztető lila megjelenésűek, ha fénymikroszkóp alatt megfigyelik a Gram-festést követően., Ennek oka a lila kristály lila folt megtartása a sejtfal vastag peptidoglikán rétegében. A Gram-pozitív baktériumok közé tartozik az összes staphylococcus, az összes streptococcus és néhány listeria faj.
Gram negatív baktériumok
Gram negatív baktériumok halvány vöröses színűek, ha fénymikroszkóp alatt megfigyelik a Gram festést követően. Ennek oka az, hogy sejtfaluk szerkezete nem képes megtartani a kristály lila foltot, így csak a szafranin ellennyomása színezi., A Gram-negatív baktériumok közé tartoznak az enterococcusok, a szalmonella fajok és a pseudomonas Fajok.
a Gram-festés nem használható megbízhatóan a bakteriális filogenetikai kapcsolatok értékelésére. A Gram-pozitív Fajok egyetlen membránja az ősi állapot. Történelmileg azt hitték, hogy a Gram-negatív baktériumokon található második membrán csak egyszer fejlődött ki, így az összes Gram-negatív faj szorosabban kapcsolódik egymáshoz, mint a Gram-pozitív fajokhoz., A genetikai elemzés azonban azóta kimutatta, hogy ez nem így van, és valószínűleg többször is kifejlődött a különböző vonalakban – a konvergens evolúció terméke.