Er i stand til å skille mellom bakteriell arter er viktig for en rekke grunner, fra diagnostisering av infeksjon eller kontroll av mattilsynet, for å identifisere hvilke arter det er som gir en ost det er fantastisk karakter. Bakteriearter, og selv bestemte stammer kan være differensiert ved hjelp av en rekke molekylære teknikker som PCR, kvantitativ PCR, genom sekvensering og mass spectrometry., Men selv uten å komme inn i molekylær nitty gritty, det er fenotypiske forskjeller mellom grupper av bakterier som kan brukes til å skille dem. Dette omfatter egenskaper som deres form (bacilli vs cocci for eksempel), vekst i bestemte næringsstoffer og preferanse for høy eller lav-oksygen miljø. Avhengig av den karakteristiske blir studert, bakteriearter kan bli brutt ned i brede grupper, men tatt sammen denne informasjonen kan begrense mulige identiteter i stor grad., En slik nyttig klassifikasjon – hvis en bakterie som er Gram-positive og Gram-negative – er basert på strukturen av bakterier cellevegger.
Forskjell i strukturen av Gram positive vs Gram-negativ bakterier
diagrammet nedenfor illustrerer forskjeller i strukturen av Gram positive og Gram negative bakterier. De to viktige egenskaper som fører til de forskjellige visualisering egenskaper av Gram positive og Gram negative arter er tykkelsen av peptidoglycan lag og tilstedeværelse eller fravær av ytre lipid membran., Dette er fordi veggen struktur påvirker cellens evne til å beholde crystal violet beis som brukes i Gram-farging prosedyre som kan bli visualisert under en lys mikroskop.
Gram positive bakterier har en tykk peptidoglycan lag og ingen ytre lipid membran mens de Gram-negative bakterier har en tynn peptidoglycan lag og har en ytre lipid membran.
Som Gram positive bakterier mangler en ytre lipid membran, når den er riktig å henvise til deres struktur heller enn farging egenskaper, er betegnet monoderms., Den ytre lipid membran som er besatt av Gram-negativ bakterier betyr at når det refereres til sin fysiske struktur, de er betegnet diderms.
Den Gram-farging-teknikken ble utviklet i 1884 av den danske bakteriologen Hans Christian Gram1. Mens en gramfarging vil ikke fortelle deg spesifikke arter du ser på, det kan være en rask måte å innskrenke sterkt listen over potensielle kandidater og direkte oppfølging testing der det er nødvendig.,
Gram positive vs Gram-negativ flekken
gramfarging prosedyre – å Utarbeide et eksempel
1. Etiketten på et rent glass mikroskop lysbilde med ditt eksempel identifikasjon. Påse at du bruker en blyant som mange blekk er fjernet av reagensene som brukes i fargeprosess.
2. Hvis du forbereder en side fra en væske bakteriekultur:
– Dab-en liten dråpe kultur på lysbildet ved hjelp av en steril loop. Forsiktig smøre dråpe i en sirkulær bevegelse i et område på ca 1 cm i diameter., For svært tette kulturer kan det være nødvendig å pre-fortynn din kultur for å sikre at enkelte bakterielle celler kan sees under et mikroskop etter farging.
Hvis kilden er fra en bakteriell plate:
Suspender en loop av kolonien materiale i sterilt fosfatbufret saltløsning (PBS), og fortsetter deretter som for en flytende kultur.
3. Når smøre har air-tørket, passere smurt gli gjennom en flamme to eller tre ganger.
Dette dreper mikrobene i smør og løser eksempel til lysbildet, være forsiktig for ikke å bli overopphetet prøven imidlertid som dette kan forvrenge cellenes morfologi.,
gramfarging prosedyre – Gram-farging et eksempel
1. Forsiktig flom smøre med crystal violet og la stå i 1 minutt. Vipp dekselet litt og skyll forsiktig med vann fra springen eller destillert vann.
Crystal violet er en vannløselig fargestoff som går i peptidoglycan lag i den bakterielle cellevegg.
2. Forsiktig flom smøre med Gram er jod og la stå i 1 minutt. Vipp dekselet litt og skyll forsiktig med vann fra springen eller destillert vann. Den smøre vil nå vises lilla.,
Gram er jod-løsning (jod og kalium jodid) er lagt til for å danne et kompleks med crystal violet, som er mye større og er uløselig i vann.
3. Decolorize smøre den med 95 % etanol eller aceton. Vipp dekselet litt og bruke alkohol dråpe for dråpe til alkohol går nesten klart (5-10 sekunder). Skyll med vann for å unngå over-decolorizing.
Decolorizer tørker den peptidoglycan lag, krymper og stramme den., I Gram-positive bakterier, er det stor krystall fiolett-jod komplekser er da ikke i stand til å trenge gjennom og unnslippe den tykke peptidoglycan lag, noe som resulterer i lilla fargede celler. Imidlertid, i Gram-negativ bakterier, den ytre membranen er degradert, den tynne peptidoglycan lag er i stand til å beholde crystal violet-jod komplekser og fargen er tapt.
4. Forsiktig flom med safranin counterstain og la stå i 45 sekunder. Vipp dekselet litt og skyll forsiktig med vann fra springen eller destillert vann.,
Safranin er svakt vannløselig og vil flekken bakteriell celler en lys rød, noe som muliggjør visualisering av Gram-negative celler uten å forstyrre observasjon av lilla av Gram-positive celler.
5. Tørk skyv tørr på filterpapir deretter vise smøre med en lett-mikroskop under olje-innlevelse.
Gram positive vs Gram-negativ farge
Gram positive bakterier
Gram positive bakterier har en særegen lilla utseende når observert under en lys mikroskop følgende Gram-farging., Dette er på grunn av oppbevaring av lilla krystall fiolett flekken i den tykke peptidoglycan laget i celleveggen. Eksempler på Gram positive bakterier inkluderer alle stafylokokker, alle streptokokker, og enkelte listeria-arter.
Gram-negativ bakterier
Gram-negativ bakterier vises en blek rødlig farge når det observert under en lys mikroskop følgende Gram-farging. Dette er fordi strukturen i deres celleveggen er i stand til å beholde crystal violet flekken så er farget bare av safranin counterstain., Eksempler på Gram negative bakterier inkluderer enterokokker, salmonella arter og pseudomonas-arter.
Gram-farging kan ikke brukes på en pålitelig måte å vurdere bakteriell fylogenetisk relasjoner. Den eneste membran av Gram positive arter er antatt å være den tidligere tilstand. Historisk det hadde vært antatt at den andre membran funnet på Gram negative bakterier utviklet seg bare en gang, og så alle Gram-negativ arter ble mer nært knyttet til hverandre enn de var til å Gram positive arter., Men genetiske analyser har siden vist at dette ikke å være tilfelle, og det er sannsynlig å ha utviklet seg flere ganger i forskjellige linjene – et produkt av konvergent evolusjon.