Sendo capaz de diferenciar espécies bacterianas é importante por uma série de razões, a partir do diagnóstico de infecção ou de verificação de segurança alimentar, para identificar quais as espécies que dá um queijo é fantástico personagem. Espécies bacterianas, e até mesmo estirpes específicas podem ser diferenciadas usando uma série de técnicas moleculares, tais como PCR, PCR quantitativo, sequenciamento do genoma e espectrometria de massa., Mas mesmo sem entrar na Granja molecular, existem diferenças fenotípicas entre grupos de bactérias que podem ser usadas para diferenciá-las. Isto inclui características como a sua forma (bacilli vs cocci, por exemplo), crescimento em nutrientes particulares e preferência por ambientes de oxigénio altos ou baixos. Dependendo da característica que está sendo estudada, as espécies bacterianas podem ser divididas em grandes grupos, mas juntas esta informação pode estreitar as possíveis identidades muito., Uma dessas classificações úteis – se uma bactéria é Gram positiva ou Gram negativa-é baseada na estrutura das paredes celulares bacterianas.
Diferença na estrutura de Gram-positiva vs bactérias Gram-negativas
O diagrama abaixo ilustra as diferenças na estrutura das Gram-positivas e bactérias Gram-negativas. As duas principais características que levam às diferentes propriedades de visualização de espécies Gram positivas e Gram negativas são a espessura da camada peptidoglicana e a presença ou ausência da membrana lipídica externa., Isso ocorre porque a estrutura da parede afeta a capacidade da célula para reter a mancha de violeta de cristal usada no procedimento de coloração de Gram que pode então ser visualizada sob um microscópio de luz.
as bactérias Gram-positivas têm uma espessura peptidoglycan camada e não externa membrana de lipídios, enquanto as bactérias Gram-negativas têm uma fina peptidoglycan camada e ter um exterior de membrana de lipídios.as bactérias gram positivas não possuem uma membrana lipídica externa, quando se refere corretamente a sua estrutura ao invés de propriedades de coloração, são denominadas monodermes., A membrana lipídica externa possuída por bactérias Gram negativas significa que, quando se refere à sua estrutura física, eles são denominados diderms.
A técnica de coloração Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram1. Embora uma mancha de Gram não lhe diga a espécie específica que você está olhando, pode ser uma maneira rápida de reduzir muito a lista de potenciais candidatos e testes de acompanhamento direto onde necessário.,
Gram-positiva vs Gram-negativas mancha
procedimento de Gram – Preparação de uma amostra
1. Etiquetar uma lâmina de microscópio de vidro limpo com a sua identificação da amostra. Certifique-se de que você usa um lápis como muitas tintas são removidas pelos reagentes utilizados no procedimento de coloração.
2. Se preparar o seu slide a partir de uma cultura bacteriana líquida:
Dab uma pequena cultura de gota no slide usando um ciclo estéril. Borra suavemente a gota em movimento circular numa área de aproximadamente 1 cm de diâmetro., Para culturas muito densas pode ser necessário pré-diluir a sua cultura para garantir que as células bacterianas individuais podem ser vistas sob um microscópio após coloração.se o material de origem for de uma placa bacteriana: Ressuspender um ciclo de material de Colônia em solução salina estéril de tampão fosfato (PBS) e, em seguida, proceder como para uma cultura líquida.
3. Uma vez que a mancha tenha ar seco, Passar o deslizamento manchado através de uma chama duas ou três vezes.isso mata os micróbios na mancha e fixa a amostra para o slide, tenha cuidado para não sobreaquecer a amostra, no entanto, como isso pode distorcer a morfologia celular.,procedimento de coloração de Gram-coloração de Gram numa amostra Inundar suavemente a mancha com violeta de cristal e sair por 1 minuto. Inclinar ligeiramente a lâmina e enxaguar suavemente com água da torneira ou água destilada.violeta cristal é um corante solúvel em água que entra na camada peptidoglicana na parede celular bacteriana.
2. Inundar suavemente a mancha com iodo de Gram e sair por 1 minuto. Inclinar ligeiramente a lâmina e enxaguar suavemente com água da torneira ou água destilada. A mancha agora vai parecer púrpura.,a solução de iodo de Gram (iodo e iodeto de potássio) é adicionada para formar um complexo com o violeta cristal, que é muito maior e é insolúvel na água.
3. Descolorizar o esfregaço utilizando 95 % de álcool etílico ou acetona. Inclinar ligeiramente a lâmina e aplicar a gota de álcool de gota até que o álcool corra quase limpo (5-10 segundos). Lavar imediatamente com água para evitar a descoloração excessiva.
O Descolorizador desidrata a camada peptidoglicana, encolhendo e apertando-a., Em bactérias Gram-positivas, os grandes complexos de violeta-iodo cristal são então incapazes de penetrar e escapar da espessa camada de peptidoglicano, resultando em células coradas roxas. No entanto, em bactérias Gram-negativas, a membrana externa é degradada, a fina camada de peptidoglicano é incapaz de reter os complexos de violeta-iodo cristal e a cor é perdida.
4. Inundem suavemente com contra-corrente safranin e saiam durante 45 segundos. Inclinar ligeiramente a lâmina e enxaguar suavemente com água da torneira ou água destilada.,safranina é fracamente solúvel em água e mancha as células bacterianas com um vermelho claro, permitindo a visualização de células Gram-negativas sem interferir com a observação do púrpura das células Gram-positivas.
5. Secar a lâmina em papel de filtro e, em seguida, ver o esfregaço com um microscópio luminoso sob imersão em óleo.
Gram-positiva vs Gram-negativas, de cor
as bactérias Gram-positivas
as bactérias Gram-positivas têm um distintivo roxo aparência, quando observadas em um microscópio de luz seguintes coloração de Gram., Isto é devido à retenção da mancha violeta de cristal roxo na espessa camada peptidoglicana da parede celular. Exemplos de bactérias Gram-positivas incluem todos os estafilococos, todos os estreptococos e algumas espécies de listeria.
as bactérias Gram-negativas
bactérias Gram-negativas aparecer uma pálida cor avermelhada, quando observadas em um microscópio de luz seguintes coloração de Gram. Isto é porque a estrutura de sua parede celular é incapaz de reter a mancha de violeta de cristal, por isso são coloridos apenas pela contrastain safranin., Exemplos de bactérias Gram-negativas incluem enterococos, espécies de salmonella e espécies de pseudomonas.
a coloração Gram não pode ser usada de forma confiável para avaliar as relações filogenéticas bacterianas. Acredita-se que a membrana única de espécies Gram positivas seja o estado ancestral. Historicamente, pensava-se que a segunda membrana encontrada em bactérias Gram-negativas evoluiu apenas uma vez e assim todas as espécies Gram-negativas estavam mais intimamente relacionadas umas com as outras do que com espécies Gram-positivas., No entanto, a análise genética tem mostrado que este não é o caso e é provável que tenha evoluído várias vezes em diferentes linhagens – um produto de evolução convergente.